人表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人表皮生長因子(EGF)水 平。用純化的人表皮生長因子(EGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體， 往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子(EGF)，再與 HRP 標記的 表皮生長因子(EGF)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng) 過che底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色， 并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生 長因子(EGF)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人表皮生長因子(EGF)濃度。

標本要求
1．標本處理：（1）水樣 采集后經(jīng) -20℃反復凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查
（2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相
關文獻提取進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，
可將標本放于-20℃保存，備查
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

人表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒操作步驟
1. 加樣：分別設標準孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加 50 微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
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7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
8. 測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。

注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

規(guī)格：
96 份/盒

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月